材料
• Spark Cyto 600 全自動(dòng)實(shí)時(shí)活細(xì)胞成像檢測(cè)系統(tǒng)，包含濕度盒 （Tecan）
• D300e 微量加樣器 （Tecan）
• Real Time-Glo™ MT 細(xì)胞活力試劑盒（Promega）
• HeLa 細(xì)胞 （ATCC）
• Jurkat 細(xì)胞 （RIKEN BRC）
• Greiner 384 孔白色透明底聚苯乙烯細(xì)胞培養(yǎng)微孔板（cat #：781098）
• Greiner 384孔白色聚苯乙烯細(xì)胞培養(yǎng)微孔板（cat #：781075）
• 臺(tái)盼藍(lán)，二甲基亞砜
方法
• 設(shè)定Spark Cyto 細(xì)胞培養(yǎng)條件: 37 °C ，5 % CO2
• 將MT細(xì)胞活力底物、NanoLuc®酶和細(xì)胞培養(yǎng)基孵育至37℃
• 用臺(tái)盼藍(lán)染色HeLa或Jurkat細(xì)胞并計(jì)算活細(xì)胞數(shù)
• 將細(xì)胞懸浮液稀釋至25或125個(gè)活細(xì)胞/l，并以40l/孔（1000或5000個(gè)細(xì)胞/孔）的濃度將其接種在384孔板中，在37℃的CO2培養(yǎng)箱中過(guò)夜
說(shuō)明
• 通過(guò)單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)提前確定合適的細(xì)胞接種密度
• 細(xì)胞接種可以選擇單通道或多通道手持加樣器或自動(dòng)化解決方案，如Tecan Fluent® 自動(dòng)化工作站
• 空孔使用無(wú)菌水填充，減少樣品蒸發(fā)
• 準(zhǔn)備5X RealTime-Glo試劑用于在培養(yǎng)基中稀釋MT細(xì)胞活力底物和NanoLuc 酶
• 每個(gè)孔中加入10l 5X Real Time-Glo試劑，并輕輕混合。
• 在37 °C和5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育30-60分鐘。注：無(wú)菌水和小型濕度盒提前預(yù)熱至37°C
• 使用D300e T8+分配盒移液溶解在DMSO中的化合物，劑量范圍從0到1M，并使每個(gè)孔中DMSO的總體積歸一化。注：快速移液以減小溫度波動(dòng)
• 在Spark Cyto中每1小時(shí)監(jiān)測(cè)1次發(fā)光信號(hào)，持續(xù)24-48小時(shí)（詳見實(shí)驗(yàn)方法）。注：若在檢測(cè)過(guò)程中需要向濕度盒中添加無(wú)菌水，可提前優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方法。
• 導(dǎo)出數(shù)據(jù)并使用Python 3進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。注：數(shù)據(jù)分析可以選擇Excel等其他軟件
結(jié)果和討論
通過(guò)明場(chǎng)成像24小時(shí)觀察細(xì)胞匯合度，并使用預(yù)置的程序進(jìn)行評(píng)估?；衔顰給藥24小時(shí)后，細(xì)胞匯合度受到抑制，并呈現(xiàn)劑量依賴性，表明化合物A抑制了細(xì)胞增殖（圖1）。
(A) 使用Spark Cyto獲得的HeLa 細(xì)胞明場(chǎng)圖像 (B) 細(xì)胞匯合度隨時(shí)間的變化 (C) 化合物A給藥24小時(shí)后的歸一化值（N = 4，mean ± 95 % CI） 使用基于發(fā)光的方法檢測(cè)細(xì)胞活力。在0小時(shí)的發(fā)光信號(hào)定義為陰性對(duì)照（圖2A），24小時(shí)內(nèi)呈現(xiàn)明顯的劑量效應(yīng)（圖2B）。與圖1的結(jié)果抑制，化合物A降低了細(xì)胞活力，并呈現(xiàn)劑量依賴性。Spark Cyto的細(xì)胞匯合度和細(xì)胞活力數(shù)據(jù)可用于評(píng)估藥物療效。
同時(shí)檢測(cè)了懸浮細(xì)胞Jurkat的細(xì)胞活力，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示化合物B抑制了細(xì)胞增殖或誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，并呈現(xiàn)劑量依賴性（圖3）。
結(jié)論
D300e和Spark Cyto的成功聯(lián)用，為藥物對(duì)HeLa和Jurkat細(xì)胞的活力和生長(zhǎng)的影響提供了綜合數(shù)據(jù)，證明了該裝置適用于貼壁或懸浮細(xì)胞的藥物分析。兩種不同檢測(cè)方法的同時(shí)使用，突顯出Spark Cyto在多重實(shí)驗(yàn)分析中的實(shí)力。
（文章來(lái)源：hmez.huimeihealth.com.cn/hm/scrm/scrmmobile/eda/1654774561053659136）
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