| 圣猶達(dá)兒童研究醫(yī)院的科學(xué)家揭示了兩種帕金森病相關(guān)蛋白的復(fù)雜結(jié)構(gòu)，這兩種蛋白都與晚發(fā)性病例有關(guān)。富亮氨酸重復(fù)激酶2 (LRRK2)是一種在磷酸化過(guò)程中修飾其他蛋白質(zhì)的蛋白激酶，Rab29是Rab GTP酶家族的成員，它調(diào)控著細(xì)胞的運(yùn)輸，并調(diào)節(jié)著LRRK2的活性。目前還不清楚Rab29和LRRK2是如何協(xié)同作用導(dǎo)致帕金森病的。圣猶達(dá)大學(xué)的研究人員確定了與Rab29結(jié)合的LRRK2的結(jié)構(gòu)，揭示了LRRK2調(diào)控背后的奧秘，并提出了對(duì)藥物設(shè)計(jì)有意義的見解。
這項(xiàng)研究成果發(fā)表在《科學(xué)》（Science）雜志上。
帕金森病是僅次于阿爾茨海默病的第二大常見神經(jīng)退行性疾病，65歲以上的老年人口中有1-2%的人患有該病。眾所周知，帕金森病與遺傳有關(guān)，約15%的病例有家族史。雖然與該疾病相關(guān)的基因有很多，但LRRK2突變是最常見的原因之一。由于LRRK2 體積龐大，LRRK2的結(jié)構(gòu)研究一直很麻煩。
圣猶達(dá)大學(xué)結(jié)構(gòu)生物學(xué)系通訊作者Ji Sun博士說(shuō):“這種蛋白質(zhì)的研究極具挑戰(zhàn)性。”
盡管困難重重，Ji Sun和他的團(tuán)隊(duì)還是2021年在Cell上發(fā)表了全長(zhǎng)LRRK2的第一個(gè)結(jié)構(gòu)。
“在第一篇論文中，我們得到了LRRK2的結(jié)構(gòu)，但該結(jié)構(gòu)顯示出非活性構(gòu)象，”Ji Sun解釋說(shuō)。蛋白質(zhì)通常有活躍和不活躍的形式，由不同的細(xì)胞信號(hào)調(diào)節(jié)。有時(shí)，它需要與另一種蛋白質(zhì)結(jié)合才能觸發(fā)結(jié)構(gòu)變化，使蛋白質(zhì)從非活性形狀變?yōu)榛钚孕螤睢?ldquo;所以，我們開始思考，‘我們有LRRK2的一個(gè)關(guān)鍵狀態(tài)。我們能得到它的活性構(gòu)象嗎?’”
冷凍電鏡捕捉到LRRK2的活性狀態(tài)
尋找活性構(gòu)象并不像將Rab29添加到LRRK2中那么簡(jiǎn)單。LRRK2 可以與其他 LRRK2 分子結(jié)合，這一過(guò)程稱為寡聚化。這可以將單個(gè)LRRK2單體(一個(gè)單元)轉(zhuǎn)化為二聚體(兩個(gè)單元)，甚至更大的組裝體。這意味著研究人員必須尋找代表活性形式的版本。還有一個(gè)問題是Rab29位于細(xì)胞膜上。
“在細(xì)胞中，大約90%或更多的LRRK2是細(xì)胞質(zhì)，”Sun解釋說(shuō)，指的是細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞膜包裹的液體，含有細(xì)胞的許多成分。“非常少量位于膜表面并形成大的低聚物。這些都是活躍的和功能性的版本。”
文章第一作者，St. Jude結(jié)構(gòu)生物學(xué)系的Hanwen Zhu博士，使用低溫電子顯微鏡確定了Rab29-LRRK2復(fù)合物的第一個(gè)結(jié)構(gòu)。這包括單體(一對(duì))和二聚體(兩對(duì))的結(jié)構(gòu)，以及意想不到的四聚體(四對(duì))。“我們對(duì)這些結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)感到非常興奮，因?yàn)樗鼈兇砹说谝粋€(gè)在活躍狀態(tài)下捕獲的高分辨率LRRK2結(jié)構(gòu)”。
Sun補(bǔ)充說(shuō):“在這個(gè)四聚體中，我們看到了LRRK2的活性構(gòu)象，但在單體和二聚體復(fù)合物中，LRRK2處于非活性構(gòu)象。”
了解Rab29-LRRK2復(fù)合物
這些發(fā)現(xiàn)表明，LRRK2的激活不僅取決于與之相互作用的蛋白質(zhì)，還取決于它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)的空間排列。
“我們提出了從單體到四聚體在膜募集的過(guò)渡，在細(xì)胞內(nèi)，它主要是LRRK2的非活性單體或二聚體。但當(dāng)Rab29將LRRK2招募到膜上時(shí)，LRRK2的局部濃度增加。這促進(jìn)了向四聚體的轉(zhuǎn)變，其中LRRK2變得活躍。”
這對(duì)帕金森病有什么影響?這些結(jié)構(gòu)為研究人員提供了一個(gè)原子尺度的地圖，追蹤導(dǎo)致帕金森病的不同突變?nèi)绾斡绊懺搹?fù)合體的功能。
Sun說(shuō):“所有這些突變實(shí)際上都有利于活性構(gòu)象，這意味著它們?cè)诨钚詷?gòu)象中提供新的相互作用，或者破壞非活性構(gòu)象中的相互作用。”“突變的影響可以在我們的結(jié)構(gòu)中漂亮地可視化：它解釋得很好。”
這種結(jié)構(gòu)研究的重要性不僅在于獲得的新見解，還在于它們?cè)谒幬镌O(shè)計(jì)中的潛在應(yīng)用。例如，研究人員還捕獲了藥物DNL201存在時(shí)LRRK2的結(jié)構(gòu)。這種藥物通過(guò)了第一階段的臨床試驗(yàn)，將蛋白質(zhì)鎖定在活性狀態(tài)，因此它被用來(lái)驗(yàn)證他們的發(fā)現(xiàn)，即四聚體確實(shí)是復(fù)合物的活性形式。
“我們現(xiàn)在有一個(gè)不活躍的構(gòu)象和一個(gè)活躍的構(gòu)象，所以我們可以監(jiān)測(cè)從不活躍到活躍狀態(tài)的轉(zhuǎn)變，這些結(jié)構(gòu)為藥物化學(xué)家設(shè)計(jì)用于治療帕金森病的新型LRRK2抑制劑提供了急需的見解。”
（文章來(lái)源：www.ebiotrade.com/newsf/2023-12） | 
