嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷(SCIDs)是一組使人衰弱的原發(fā)性免疫缺陷疾病，主要由破壞t細(xì)胞發(fā)育的基因突變引起。SCID還可以影響b細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞的功能和計(jì)數(shù)。如果不及時(shí)治療，SCID在生命的第一年就會(huì)致命。SCID患者的傳統(tǒng)治療包括同種異體造血干細(xì)胞移植(HSCT)，但尋找相容供體的挑戰(zhàn)和潛在的并發(fā)癥，如移植物抗宿主病(GVHD)，對(duì)這種方法構(gòu)成了重大障礙。
隨著基因組編輯(GE)的出現(xiàn)，特別是使用CRISPR-Cas9技術(shù)，一種突破性的解決方案已經(jīng)出現(xiàn)。這項(xiàng)前沿的基因治療研究為許多遺傳疾病如SCID帶來(lái)了希望。CRISPR-Cas9系統(tǒng)在DNA中產(chǎn)生特定位點(diǎn)的雙鏈斷裂，從而實(shí)現(xiàn)精確的基因編輯。修復(fù)過(guò)程可以破壞一個(gè)特定的基因，也可以糾正它，幾乎可以針對(duì)基因組中的任何基因。這一發(fā)展為廣泛的基因組疾病的治療干預(yù)打開(kāi)了大門。
作為一種有前途的基因組編輯方法，CRISPR-Cas9同源定向修復(fù)(HDR)介導(dǎo)的GE，提供了精確基因插入的潛力。在某些SCID亞型中，HSCT的替代方法可能涉及傳統(tǒng)的CRISPR-Cas9 hdr介導(dǎo)的基因插入，但它具有固有的風(fēng)險(xiǎn)，特別是在RAG2-SCID等病例中。RAG2是淋巴細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中參與DNA切割的核酸酶，CRISPR-Cas9 hdr介導(dǎo)的基因插入可能導(dǎo)致RAG2核酸酶活性失控和有害的結(jié)構(gòu)變異。
作為回應(yīng)，以色列巴伊蘭大學(xué)的研究人員提出了一種新的替代策略，稱為GE x HDR 2.0:發(fā)現(xiàn)和替換。今天發(fā)表在《自然通訊》上的一篇論文概述了這種方法，它將CRISPR-Cas9介導(dǎo)的基因組編輯與重組腺相關(guān)血清型6 (rAAV6) DNA供體載體結(jié)合起來(lái)，在保留調(diào)控元件的同時(shí)精確地替換RAG2編碼序列。這種策略也可以應(yīng)用于其他具有致病突變熱點(diǎn)區(qū)域的基因。
Bar-Ilan大學(xué)Goodman生命科學(xué)學(xué)院的Ayal Hendel博士強(qiáng)調(diào)說(shuō):“我們的創(chuàng)新取決于一個(gè)關(guān)鍵的見(jiàn)解:為了有效地觸發(fā)CRISPR-Cas9 hdr介導(dǎo)的GE進(jìn)行精確的編碼序列替換，必須將遠(yuǎn)端同源臂從切割位點(diǎn)分離出來(lái)，并將其與需要替換的片段的下游序列對(duì)齊。在這個(gè)過(guò)程中，延長(zhǎng)供體的遠(yuǎn)端同源臂長(zhǎng)度是至關(guān)重要的。通過(guò)保留內(nèi)源性調(diào)控元件和內(nèi)含子序列，我們的方法忠實(shí)地再現(xiàn)了自然基因表達(dá)水平，從而降低了基因表達(dá)不受調(diào)控的相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)。這項(xiàng)突破性的技術(shù)包括替換整個(gè)編碼序列或外顯子，同時(shí)保留關(guān)鍵的調(diào)控元件，為RAG2-SCID患者帶來(lái)了希望，并為治療各種其他遺傳疾病帶來(lái)了希望。”
（文章來(lái)源：www.ebiotrade.com/newsf/2023-11） | 
