3.動物疫病多重檢測
多重PCR技術(shù)一次擴(kuò)增反應(yīng)即可實(shí)現(xiàn)對多種病原體進(jìn)行檢測，相較單重檢測而言成本顯著降低。但是仍然存在許多影響多重PCR擴(kuò)增與檢測效果的因素，其中多個(gè)靶標(biāo)擴(kuò)增效率的一致性是最大的難題，檢測重?cái)?shù)越多，效率一致性往往越低。dRCR采用終點(diǎn)熒光檢測和納米微孔分區(qū)技術(shù)，檢測結(jié)果不受擴(kuò)增效率的影響，能準(zhǔn)確定量和避免漏檢。
目前主流品牌的dRCR儀均有多個(gè)檢測通道，如羅氏診斷的Digital LightCycler數(shù)字PCR儀擁有6個(gè)檢測通道，可實(shí)現(xiàn)6重病原檢測。下圖應(yīng)用羅氏dRCR儀同時(shí)檢測禽流感H5、H7、H9亞型和新城疫病毒4個(gè)病原，各檢測通道間無干擾，定量結(jié)果準(zhǔn)確性高。
圖5 羅氏Digital LightCycler數(shù)字PCR儀多重檢測
4.抗原快速診斷產(chǎn)品的評價(jià)
來源不同廠家的抗原快檢試劑，靈敏度差異較大。dPCR可以絕對定量待測樣品中的病原核酸，從而精準(zhǔn)的評價(jià)抗原檢測試劑的檢測限。
5.動物疫苗研發(fā)中的應(yīng)用
dPCR可對重組腺病毒疫苗等活載體疫苗進(jìn)行定量，作為生產(chǎn)過程中質(zhì)量評價(jià)、活性滴定、雜質(zhì)評估的有力工具。同時(shí)，dPCR可定量動物血液中微量的病毒，可作為疫苗免疫效果評價(jià)的有效工具。
6.動物源性成分檢測
世界各國每年都會有許多肉類摻假事件被曝光，包括將廉價(jià)肉摻入高價(jià)肉或添加非肉成分冒充肉及肉制品等。dPCR技術(shù)可直接對物種特異性DNA的拷貝數(shù)進(jìn)行絕對定量，只需構(gòu)建物種特異性DNA拷貝數(shù)與肉粉重量之間的關(guān)系曲線，即可對肉制品含量進(jìn)行定量。
三、納米微孔芯片數(shù)字PCR儀新貴
Digital LightCycler數(shù)字PCR儀是羅氏最新推出的高性能產(chǎn)品，充分拓展數(shù)字PCR的應(yīng)用領(lǐng)域。
圖6羅氏Digital LightCycler 數(shù)字PCR儀
羅氏Digital LightCycler儀亮點(diǎn)
1.應(yīng)用靈活：陣列式納米芯片技術(shù)，3種密度芯片可更換；
2.多重檢測：6 重?zé)晒舛嗌珯z測，便于開發(fā)更多的應(yīng)用；
3.高度自動化：分析系統(tǒng)整合PCR反應(yīng)、芯片檢測功能；
4.通量高單次檢測 8-96個(gè)樣本，適合科研及臨床檢測；
5.時(shí)間快：單塊板1.5h, 八塊板滿載則 4h 內(nèi)完成樣品擴(kuò)增、分析；
6.5x預(yù)混液: 更大的樣品量輸入；
四、結(jié)語
dPCR以明顯的技術(shù)優(yōu)勢，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于核酸檢測的方方面面。dRCR在病原微生物檢測，腫瘤液態(tài)活檢，遺傳生殖檢測，公共衛(wèi)生檢測，環(huán)境微生物檢測，RNA表達(dá)檢測，NGS文庫定量，甲基化檢測等領(lǐng)域都發(fā)揮著越發(fā)重要的作用。通過建立完善的dPCR檢測流程，相信dPCR能讓蓬勃發(fā)展的分子診斷如虎添翼。
