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單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)是指在單細(xì)胞水平上對(duì)核酸分子進(jìn)行測(cè)序的技術(shù)。近年來,單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)異軍突起,成為分子生物學(xué)研究的熱點(diǎn),在醫(yī)學(xué)、生物化學(xué)、生命科學(xué)等領(lǐng)域取得了卓越的成果,也成為了單細(xì)胞生態(tài)學(xué)的重要組成部分。
目前10X Genomics平臺(tái)是市場(chǎng)上最為常見的單細(xì)胞測(cè)序平臺(tái)，基于10X Genomics平臺(tái)的高通量單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)是利用液滴法的原理，使用GemCode技術(shù)，通過控制微流體的進(jìn)入，將帶barcode、UMI（Unique Molecular Index，分子標(biāo)簽）、引物及酶的凝膠珠（Gel Beads）與單細(xì)胞混合，從而實(shí)現(xiàn)大規(guī)模的單細(xì)胞分離，以及單細(xì)胞文庫構(gòu)建的技術(shù)。
設(shè)備的工作原理：首先將樣本制備成單細(xì)胞懸液。將制備好的細(xì)胞懸浮液利用微流控芯片，將帶有細(xì)胞標(biāo)簽序列的凝膠珠（bead）和細(xì)胞包裹在液滴中。在液滴中，細(xì)胞破裂，釋放的mRNA與凝膠珠上的細(xì)胞標(biāo)簽序列相連，形成單細(xì)胞GEMs結(jié)構(gòu)（Gel Bead in Emulsions）。細(xì)胞的mRNA在液滴中進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)形成cDNA，隨后破乳，進(jìn)行 cDNA 的文庫構(gòu)建。通過文庫序列上的細(xì)胞標(biāo)簽序列可以區(qū)分目標(biāo)序列來自于哪一個(gè)細(xì)胞。細(xì)胞和反應(yīng)試劑在微流控芯片上的一條通道中，凝膠珠在另一條通道，共同形成GEM。在每個(gè)GEM中獨(dú)立進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，之后帶有標(biāo)簽的 cDNA 將被混合然后擴(kuò)增再進(jìn)行文庫構(gòu)建。
使用10X Genomic平臺(tái)完成對(duì)單個(gè)細(xì)胞的分離與標(biāo)記后，接下來就是采用NGS技術(shù)對(duì)標(biāo)記后的細(xì)胞進(jìn)行測(cè)序分析。
奧美泰克作為實(shí)驗(yàn)室國產(chǎn)自動(dòng)化解決方案提供商，深耕NGS建庫自動(dòng)化領(lǐng)域，針對(duì)不同試劑廠家的建庫試劑盒定制開發(fā)了一系列成熟的自動(dòng)化解決方案，大大減少了由于建庫流程中繁雜的實(shí)驗(yàn)操作導(dǎo)致的人力與時(shí)間上的投入，降低了由于人為誤差導(dǎo)致的出錯(cuò)風(fēng)險(xiǎn)。
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AMTK LH-1808全自動(dòng)液體處理工作站整合了溫控模塊、加熱震蕩模塊、磁分離模塊，全自動(dòng)PCR模塊，可輕松實(shí)現(xiàn)文庫構(gòu)建的全流程自動(dòng)化。
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