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診斷試劑盒的開發(fā)和選擇

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所研究員/哈爾濱國生生物科技股份有限公司董事長王云峰在會(huì)上分享了禽病凈化試劑盒研究概況。他指出，動(dòng)物疫病檢測試劑盒對疫病控制、疾病凈化和動(dòng)物福利都有重要意義。當(dāng)前國內(nèi)通過注冊了14種禽病檢測試劑盒，主要集中在禽白血病和禽流感產(chǎn)品，但在雞沙門氏菌病領(lǐng)域只有凝集試驗(yàn)一個(gè)產(chǎn)品，在禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病、雞傳染性貧血的檢測能力和技術(shù)手段還有待提高。他認(rèn)為，開發(fā)診斷試劑盒的技術(shù)難度和要求不比疫苗低。

王云峰認(rèn)為當(dāng)前檢測試劑盒開發(fā)傳統(tǒng)技術(shù)應(yīng)用多，創(chuàng)新型技術(shù)應(yīng)用不足，但他也認(rèn)為能解決問題的方法就是好的方法。他介紹了基于現(xiàn)有成熟技術(shù)路徑進(jìn)行的系列新產(chǎn)品的開發(fā)工作，包括：禽白血病系列檢測技術(shù)，禽流感系列檢測技術(shù)，雞沙門氏菌病檢測技術(shù)，其他待凈化疾病檢測技術(shù)（如新城疫、禽支原體、雞毒支原體、雞傳染性法氏囊病等）。

普萊柯生物工程股份有限公司副總經(jīng)理/國家獸用藥品工程技術(shù)研究中心主任田克恭分享了不同應(yīng)用場景下豬病檢測方法的選擇與應(yīng)用。我國豬病種類多、型別多、變異快，并且疫苗種類多，免疫程序復(fù)雜，疫病診斷背景復(fù)雜，做好疫病診斷的難度比國外更大。田克恭舉例說明了針對不同的檢測目的與應(yīng)用場景（如感染診斷、免疫評估、疫病凈化）應(yīng)注意的要點(diǎn)。

如選擇感染診斷用試劑盒，應(yīng)根據(jù)動(dòng)物疫病發(fā)生與發(fā)展過程，在感染診斷中選擇不同檢測方法應(yīng)用。以非洲豬瘟為例：2019年感染病毒滴度高，毒力強(qiáng)。早期核酸檢測是首選，感染后期ELISA抗體檢測試劑盒可發(fā)揮巨大作用。到了2023年上半年，感染后無明顯癥狀，病毒載量低，在核酸檢測的同時(shí)，要有好的抗體檢測方法。

選擇免疫評估用試劑盒，以口蹄疫為例，判斷標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)是與攻毒保護(hù)或病毒中和抗體具有良好相關(guān)性的。

選擇凈化監(jiān)測用試劑盒，以偽狂犬為例，選擇gE基因缺失疫苗+鑒別診斷試劑盒配合，在疫苗的免疫診斷上選擇gD蛋白優(yōu)于gB蛋白。田克恭認(rèn)為gD蛋白是偽狂犬病最重要的免疫保護(hù)相關(guān)蛋白，更適用于作為免疫效果評估但診斷靶標(biāo)，使用gD抗體檢測試劑盒用于免疫效果評價(jià)更科學(xué)。

2025年全球動(dòng)物診斷市場有望達(dá)到415億美元

動(dòng)物診斷行業(yè)在發(fā)達(dá)國家相對成熟，在我國處于初步階段。廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物衛(wèi)生研究所翟少倫研究員（廣州維伯鑫生物科技有限公司特邀嘉賓）分享了廣東省獸用診斷制品行業(yè)高質(zhì)量發(fā)展路徑與策略。根據(jù)Medical咨詢，2021年全球動(dòng)物診斷市場容量約370億美元，滲透率約為12.4%，預(yù)計(jì)2045年達(dá)到415億美元，中國等新興市場將迎來跨越發(fā)展。愛德士作為行業(yè)龍頭占據(jù)絕對領(lǐng)導(dǎo)地位，市場份額占比達(dá)到68%。

中國獸用診斷市場潛力巨大，發(fā)展迅速，華經(jīng)產(chǎn)業(yè)研究認(rèn)為2025年中國獸用診斷制品行業(yè)市場規(guī)?？蛇_(dá)131億元。2020年中國獸用診斷制品畜禽類占比39.74%，寵物類占比60.26%。廣東是中國獸用診斷制品生產(chǎn)企業(yè)最多的省份，擁有26家取得獸藥GMP和獸藥生產(chǎn)許可的生產(chǎn)企業(yè)（占全國的25%）。但廣東GMP企業(yè)多而不強(qiáng)，且行業(yè)呈現(xiàn)內(nèi)卷。

翟少倫研究員分享了廣東獸用診斷制品行業(yè)高質(zhì)量發(fā)展的9條路徑和策略：1、圍繞國家重大需求、行業(yè)急需，研發(fā)注冊產(chǎn)品；2、熟悉國家獸用診斷制品注冊管理辦法；3、差異化產(chǎn)品布局發(fā)展；4、研、產(chǎn)、用緊密聯(lián)合研發(fā)新產(chǎn)品；5、堅(jiān)持產(chǎn)品質(zhì)量第一，促進(jìn)質(zhì)量提升；6、加強(qiáng)新產(chǎn)品宣傳，得到國內(nèi)客戶認(rèn)可；7、利用一帶一路、廣交會(huì)，拓展歐美、東南亞等市場；8、良性競爭才能促進(jìn)行業(yè)發(fā)展；9、適時(shí)引入資本力量。

   廣州敏捷生物技術(shù)有限公司技術(shù)總監(jiān)李立分享了時(shí)間分辨免疫熒光層析技術(shù)在動(dòng)物疫病檢測中的應(yīng)用。該技術(shù)以納米稀土熒光微球?yàn)樯锸聚櫸?，整合了免疫熒光?biāo)記技術(shù)、免疫檢測技術(shù)、側(cè)向免疫層析技術(shù)，是新一代的智能化快速檢測技術(shù)，擁有靈敏度高（最低可至pg/ml）、檢測速度快（最快短至3min）、試劑常溫儲(chǔ)存，既能定性又能定量測試，隨到隨做，適應(yīng)多檢測環(huán)境等顯著優(yōu)點(diǎn)；李立總監(jiān)還介紹了該技術(shù)在寵物醫(yī)院、養(yǎng)殖場抗原抗體檢測、飼料霉菌毒素等不同場景下的應(yīng)用。

做好疫病監(jiān)測，抓住關(guān)鍵PRDC相關(guān)疾病防控

   做好監(jiān)測預(yù)警對動(dòng)物疫病整體防控意義重大。廣東省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心盧受昇副主任分享動(dòng)物疫病監(jiān)測預(yù)警模式探討。他分享了廣東省監(jiān)測預(yù)警的歷年數(shù)據(jù)，討論了實(shí)現(xiàn)監(jiān)測預(yù)警的幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。他認(rèn)為，預(yù)警需要足夠長的全面真實(shí)的歷史；從農(nóng)場到餐桌供應(yīng)鏈的各個(gè)環(huán)節(jié)陽性率是緊密聯(lián)系的一個(gè)系統(tǒng)；統(tǒng)籌考慮大生態(tài)系，擴(kuò)大監(jiān)測廣度；聯(lián)系社會(huì)、經(jīng)濟(jì)因素，擴(kuò)充監(jiān)測維度；充分應(yīng)用好新的生物、信息技術(shù)；每個(gè)場、每個(gè)單位根據(jù)自身實(shí)際開展監(jiān)測，久久為功，建立基礎(chǔ)數(shù)據(jù)庫，都能實(shí)現(xiàn)一定程度的預(yù)警。

   勃林格股格翰動(dòng)物保?。?/span>BI）全國資深技術(shù)服務(wù)經(jīng)理唐閆利分享了豬場SHK健康管理體系的概念與整體解決方案。BI以臨床癥狀和剖檢變化為基礎(chǔ)，結(jié)合創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)室診斷和生產(chǎn)管理等，對多個(gè)疾病進(jìn)行防治，發(fā)展成為一套SHK健康管理體系。SHK全稱為Swine Health Key，核心在于幫助豬場鎖定關(guān)鍵病原，厘清疫病防控思路。BI定義了10種關(guān)鍵疾病，其中5種屬于PRDC相關(guān)疾病。唐閆利介紹，BI在全國范圍內(nèi)進(jìn)行了PRDC大數(shù)據(jù)分析，發(fā)現(xiàn)藍(lán)耳、圓環(huán)在養(yǎng)殖場同時(shí)存在的養(yǎng)殖場檢出率超過90%，二者同時(shí)陰性的養(yǎng)殖場幾乎為0。基于調(diào)查結(jié)果BI提出SHK健康管理解決方案：1、監(jiān)測預(yù)警診斷；2、預(yù)防治療；3、優(yōu)化生產(chǎn)；4、生物安全體系。

江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所邵國青研究員分享了豬支原體肺炎防控技術(shù)與效力評價(jià)。支原體是世界范圍內(nèi)流行的最重要的豬細(xì)菌病，其病原穩(wěn)定，血清型單一。他認(rèn)為當(dāng)前支原體肺炎防控關(guān)鍵技術(shù)基本清楚，在解決措施上有變化。邵國青回顧了支原體的發(fā)現(xiàn)與疫苗研究歷程。他認(rèn)為活疫苗和滅活苗均有免疫效果，但與病毒疫苗相比效果差別較大。

氣喘病發(fā)生有三大特點(diǎn)：增殖傳播非常慢，進(jìn)行性病變演化，持續(xù)感染期超長達(dá)6個(gè)月。豬只出現(xiàn)癥狀在18個(gè)月左右，我國在13-14周可產(chǎn)生明顯癥狀。

邵國青認(rèn)為肺炎支原體繁殖緩慢的特性為阻斷其傳播帶來思路，堅(jiān)持長期免疫是保護(hù)的方法。健康管理與生物安全是發(fā)揮疫苗效力的前提，可使疫苗免疫和藥物選擇相配合。

邵國青介紹了疫苗的種類和時(shí)機(jī)選擇。我國168株支原體肺炎活疫苗截止2023年簽發(fā)110批，市場使用超過1億頭份，臨床統(tǒng)計(jì)保護(hù)有效率平均80%，對易感的中國土豬尤其有效，一針靶向免疫，保護(hù)期大于9個(gè)月。他還介紹了其他免疫途徑，包括：靶向免疫、氣霧免疫、肌肉注射免疫、鼻腔內(nèi)免疫等。邵國青認(rèn)為氣喘病的凈化對當(dāng)前的規(guī)?；B(yǎng)豬意義重大。

多種病毒可引發(fā)腹瀉，S-indel毒株P(guān)EDV比例上升值得關(guān)注

下午，華中農(nóng)業(yè)大學(xué)肖少波教授分享了豬病毒性腹瀉及其防控措施。從2022年的臨床樣品PEDV測序分析情況來看，G2型變異株仍是主流，G2a、G2b共存是當(dāng)前防控的難點(diǎn)，S-indel毒株比例上升值得關(guān)注。肖少波介紹，遺傳進(jìn)化分析顯示S-indel毒株是G2型和G1型的重組毒株，毒力弱于G1、G2毒株。其是否與最近流行的懷孕母豬“腹瀉+流產(chǎn)”情況相關(guān)尚無定論。

除了PEDV，豬Delta冠狀病毒（PDCoV）有上升趨勢，在全國抗原陽性率在10-33%。除了引起腹瀉，其組織嗜性廣泛，可以感染豬肺泡巨噬細(xì)胞，提升藍(lán)耳感染率，提高臨床發(fā)病嚴(yán)重程度。中國PDCoV毒株相對穩(wěn)定，但肖少波提示東南亞毒株可能已經(jīng)傳入我國。去年開始出現(xiàn)單純感染PDCov引起仔豬腹瀉脫水死亡的案例，說明其毒力出現(xiàn)提升。

此外，豬輪狀病毒卷土重來，2022年東北地區(qū)流行性高達(dá)77.94%，先發(fā)輪狀再發(fā)PEDV的情況非常多。臨床上豬腸道冠狀病毒與輪狀病毒混合感染嚴(yán)重。

肖少波介紹了有效防控豬病毒性腹瀉的幾點(diǎn)措施：做好全面生物安全，開展定期病原檢測，選擇有針對性的疫苗，制定合理的免疫程序。他指出，PEDV不同血清型交叉保護(hù)力有限，探索開發(fā)多血清型疫苗進(jìn)行防控。

東莞市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心正高級獸醫(yī)師張險(xiǎn)朋（伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品(上海)有限公司特邀嘉賓）分享了微滴式數(shù)字PCR在動(dòng)物疫病檢測領(lǐng)域的應(yīng)用。數(shù)字PCR可以將指數(shù)型函數(shù)轉(zhuǎn)化成線性函數(shù)，對模板進(jìn)行有限稀釋，根據(jù)熒光信號(hào)的有或無進(jìn)行精確定量，稱為第三代PCR技術(shù)。目前數(shù)字PCR方法在食品致病菌、動(dòng)物植物源性疾病的診斷等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。他詳細(xì)介紹了動(dòng)物疫病數(shù)字PCR的檢測標(biāo)準(zhǔn)建立情況以及微滴式數(shù)字PCR在動(dòng)物疫病領(lǐng)域的應(yīng)用優(yōu)勢。他認(rèn)為數(shù)字PCR技術(shù)在低病原濃度樣品檢測和標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物疫病的樣品標(biāo)定種具有天然優(yōu)勢，可以做到絕對定量，并且該方法日趨成熟，相信未來隨著成本降低，數(shù)字PCR技術(shù)在動(dòng)物疫病檢測種將得到廣泛應(yīng)用。

羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司資深科研價(jià)值專家彭鑫進(jìn)行了動(dòng)物病原體高靈敏多重檢測——數(shù)字PCR系統(tǒng)介紹。數(shù)字PCR的獨(dú)特特性使其具有影響腫瘤學(xué)、傳染病、移植和其他領(lǐng)域的臨床研究的巨大潛力。他談到LightCyclerR數(shù)字PCR系統(tǒng)擁有3種不同配置納米孔芯片涵蓋多種應(yīng)用，6組先進(jìn)的檢測通道，5倍濃縮的DNA和RNA預(yù)混液。實(shí)現(xiàn)靈敏度、精確性、靈活性、工作流整合4大關(guān)鍵領(lǐng)域的進(jìn)步，提升臨床研究。